تقييم حساسية عزلات محلية من طفيلي اللشمانيا المدارية L. tropica داخل البلاعم تجاه البنتوستام (Ex vivo) ودراسة التعبير عن عدد من جينات المقاومة
الكلمات المفتاحية:
داء اللشمانيات الجلدي البشري، اللشمانيا المدارية، مركبات الأنتيموان الخماسية، البنتوستام، الأشكال داخلية السوط، جينات المقاومةالملخص
يُعدُّ دا
يُعدُّ داء اللشمانيات الجلدي البشري (ACL) Anthroponotic Cutaneous Leishmaniasis مرضاً مستوطناً في معظم المحافظات السورية، وينتج بشكل رئيس عن الإصابة بطفيلي اللشمانيا Leishmania من النوع L. tropica. إن الاستخدام طويل الأمد لمركبات الأنتيموان الخماسية Sb(V) في تدبير هذا الداء أدّى إلى تطور سلالات محلية ذات أنماط ظاهرية مختلفة من حيث درجة الحساسية الدوائية, لذا هدف هذا البحث إلى تقييم درجة الحساسية الدوائية للأشكال داخلية السوط Amastigote لعزلات محلية من النوع L. tropica تجاه دواء البنتوستام، ودراسة التعبير الجيني لكل من جينات المقاومة المحتملة التالية: GSH1 وMRPA وAQP1 وTryR وPgp A.
تم في هذا العمل عزل وحيدات النوى من الدم المحيطي البشري وزراعتها ضمن أوساط استنبات خاصة حتّى استكمال تمايزها إلى بلاعم ثم أُخمجت بالأشكال أمامية السوط Promastigote العائدة لأربع عزلات محلية (L1 – L4) من النوع L. tropica ثم عولجت هذه البلاعم المُخمَجة بثلاث تراكيز متدرجة من مركب البنتوستام لمدة 24 ساعة, بعدها حُدّد الحمل الطفيلي من الأشكال داخلية السوط داخل البلاعم المخمجة وحسبت قيمة الجرعة المثبطة للنصف لكل عزلة من العزلات الأربعة. عُزل الـ RNA الكلي من الأشكال داخلية السوط المحّولة بالحرارة وحُوّل إلى cDNA ودُرس التعبير النسبي عن جينات المقاومة باستعمال تقانة التفاعل السلسلي للبوليميراز الكمي في الزمن الحقيقي RT-qPCR. أظهرت النتائج وجود فروق معنوية في قيم الـ IC50 بين العزلات الأربعة وفق التراتبية التالية (L3>L2>L4>L1) مع تباين واضح في التأثير المثبط للبنتوستام والذي كان بحدود ((1.7 ضعفاً بين العزلة الأكثر مقاومة L3 والعزلة الأقل مقاومة L1. لم تظهر العزلات الأربعة أي اختلافات معنوية في قيم التعبير النسبي عن الجينات MRPA وAQP1, بينما أظهرت العزلة L3 فقط زيادة معنوية عن باقي العزلات بالنسبة لجين Pgp A. كما أبدت جميع العزلات فروقاً معنوية فيما بينها بالنسبة للجين GSH1 باستثناء المثنوية (L1, L4) مع وجود علاقة ارتباط قوية (r = 0.98) تجمع بين ارتفاع التعبير النسبي عن هذا الجين وزيادة قيم IC50 بين العزلات, وأيضاً أظهرت العزلات الأربعة فروقاً معنوية بالنسبة للتعبير عن جين TRYR باستثناء المثنويتين (L1, L4) و(L2, L4) وارتبط ارتفاع التعبير عن جين TRYR بزيادة قيم IC50 بين العزلات. خلُصت هذه الدراسة إلى أنّ العزلات المحلية من النوع L. tropica تُظهر درجات مختلفة من الحساسية الدوائية تجاه مركبات الأنتيموان الخماسية، وترتبط هذه الفروقات بآليات جينية منها زيادة التعبير عن الجينات GSH1 وTryR في العزلات الأكثر مقاومة, بينما يتطلب تحديد الدور المحتمل لزيادة التعبير عن جين Pgp A القيام بالمزيد من الدراسات والتحرّي. تُقدم هذه النتائج معلومات قيّمة لفهم ديناميكيات مقاومة الأدوية في داء اللشمانيات الجلدي البشري، وتُؤكد على ضرورة تطوير علاجات نوعية تستهدف مسارات المقاومة الخاصة بالعزلات المحلية.
