هندسة بروتينين خيمريين مأشوبين مثنوي ومثلوثيّ من GITRL الفأري المدمج بالمنطقة Fc للغلوبيولين المناعي البشري واستعراف خصائصهما
الكلمات المفتاحية:
لجين مستقبل عامل نخر الورم المحرّض بالغليكوكورتيكويد، مثنويّ، مثلوثيّ، بروتين مدمج بـ Fcالملخص
خلفيّة البحث وهدفه: تضمّ فوق عائلة عامل نخر الورم (TNFSF) عدداً من اللجائن والمستقبلات ذات الأدوار المحوريّة في تكاثر الخلايا المناعيّة وتمايزها وبقياها واستماتتها. يُعبّر عن لجائن هذه العائلة كبروتينات وظيفيّة مثلوثيّة عابرة للغشاء الخلوي أو ذوّابة باستثناء اللجين الفأري المثنوي لمستقبل عامل النّخر الورمي المحرّض بالغليكوكورتيكويد (mGITRL). يسهم التآثر بين GITR وGITRL في تنظيم ردّ الفعل المناعي ويمتلك استهدافه كموناً علاجيّاً مناعيّاً واعداً مضاداً للسرطان وأمراض المناعة الذّاتيّة. يشكّل إنتاج بروتينين مأشوبين مثنوي ومثلوثي من GITRL الفأري خطوة مفتاحيّة تسهم في الاستقصاءات ما قبل السّريريّة حول الخصائص العلاجيّة المحتملة لـ GITRL. الهدف: إنتاج بروتنيات GITRL مأشوبة مثلوثة trimer ومثنويّة dimer وتقييم خصائصها وقدرتها على الارتباط بـ GITR وتفعيل الخلايا التّائيّة. الطّرق: صمّم بروتينان خيمريّان مأشوبان وأنتجا في الخط الخلوي لمبيض الهامستر الصيني ((CHO. اكتنف البروتين المثنوي النطاق خارج الخلوي للبروتين الفأري mGITRL ملتحماً مع الشدفة المتبلورة Fc للضد البشري hIgG1، في حين أُنتج البروتين المثلوثيّ بتعبير مشارك لـ hFc. mGITRLمع mGITRL.HA. اختبرت قدرة البروتينين على الارتباط بـ mGITR المعبّر عنه في Jurkat البشريّة بمقايسات التّدفق الخلوي والتّرسيب المناعي المشارك، وقيّمت فعّاليتهما في تحريض اللمفاويات التّائيّة على التكاثر. النّتائج: أنتج بروتين مثنوي (hFc. mGITRL)2 وآخر مثلوث (Fc. mGITR)2:mGITRL.HA، وجرى انتقاء النّسائل الأعلى تعبيراً. أبدى كلا البروتينان قدرة متشابهة على الارتباط بخلايا Jurkat المعبّرة عن المستقبل الفأري mGITRوتفعيل اللمفاويات التّائيّة المساعدة السّاذجة CD4+CD25- وتحريض تكاثرها، مع تفوّق نسبي للبروتين المثلوث. الاستنتاجات: تبرهن نتائجنا على امتلاك البروتينين المثنويّ والمثلوث خصائص وظيفيّة متقاربة. تؤسّس هذه النتائج لإمكانيّة إنتاج GITRL مثنوي مدمج بـ Fc وتنقيته واختباره مستقبلاً في الحيّ in vivo لتقييم كمون استهدافGITR كعلاج مناعيّ للسرطان.
التنزيلات
