دراسة العوامل المؤثرة في التنميط المناعي للخلايا الجذعية الدموية CD34+وحساب العدد المطلق لها بتطبيق بروتوكول ISHAGE

الملخص

خلفية البحث وهدفه: يستخدم بروتوكول ISHAGE  للتنميط  المناعي للخلايا الجذعية الدموية ⁺CD34 لتقييم عددها وحيويتها. تحول عدة عوامل دون الإجراء الصحيح لهذا التحليل. هدفت الدراسة إلى تحديد العوامل التي تتدخل  في تعداد الخلايا CD34⁺ وضبط هذه العوامل للحصول على عدد دقيق لها لما لذلك من دور في نجاح الازدراع.

المواد و الطرائق: تم إجراء التنميط المناعي للخلايا الجذعية الدموية  بتقانة التدفق الخلوي،  بتطبيق بروتوكول ISHAGE  ودراسة العوامل  التي يمكن أن تؤثر على تعداد الخلايا  CD34⁺وهي نسيلة ضد CD34، وتركيزها ومدة حضنها مع الخلايا، ومدة تخزين العينة، والمحلول الحال للكريات الحمراء، والعوامل التي تتعلق بالجهاز كمعدل تدفق العينة، وعتبة التبعثر الأمامي، وتأثير ضبط القطاعات وبوابات التحليل. طبقت الدراسة على عينات من 11 مريض في مشفى الأطفال قيد التحضير للزرع الذاتي باستخدام الخلايا الجذعية المقطوفة من الدم المحيطي بعد التحريض بـ G-CSF. تم سحب عينات من الدم المحيطي في اليوم السابق من عملية قطف الخلايا الجذعية، ومن الدم المحيطي في يوم عملية القطف ومن منتج القطف.

النتائج:  كانت نسيلة ضد CD34 8G12 أفضل من النسيلة 581 و MY10 (P= 0.03 ,0.06, على التوالي). إن تركيز الضد 10% كان الأمثل.  إنَّ حل الكريات الحمراء بوجود مثبت انعكس بشكل هام إحصائياً على تعداد الخلايا. لا بد أن يرافق هذه العوامل معدل تدفق للخلايا 3000 خلية / ثا ((0.02, 0.04 =P وعتبة تبعثر أمامي 100 مع صحة ضبط بوابات تحليل البيانات وإعدادات الجهاز حيث تؤدي دوراً  كبيراً في الحصول على تعداد صحيح للخلايا CD34⁺. احتوى منتج القطف على 7 أضعاف من الخلايا CD34⁺ مقارنة مع الدم المحيطي بعد التحريض (175 ± 29.98  مقابل  1250±300 خلية / مكرولتر).

الاستنتاجات: إنَّ العوامل المؤثرة في تعداد الخلايا الجذعية متعددة. لا بد من التركيز على هذه العوامل لتحسين استثمار بروتوكول  ISHAGE للحصول على العدد الدقيق للخلايا الجذعية لما لذلك من أهمية في نجاح عملية الازدراع.