أمثلة شروط التثبيت لأجل الدراسة الجزيئية لجين MED12 في أنسجة الأورام العضلية الملساء الرحمية المثبتة بالفورمالين والمدمجة بالبارافين

الملخص

الملخص:

خلفية البحث وهدفه: تعد الطفرات في exon2-MED12 من الأسباب الرئيسية  لتشكل الورم العضلي الأملس الرحمي. تعد الظروف المناسبة للتثبيت ضرورية لنجاح استخلاص الحمض النووي وتضخيمه بالتفاعل السلسلي للبوليمراز. استكشفت الدراسة ما إذا كان الحمض النووي المستخرج من الأنسجة المحفوظة والمثبتة بالفورمالين والمدمجة بالبارافين مناسبًا لتضخيم exon2-MED12 بالتفاعل السلسلي للبوليمراز وبحثت في الظروف المعززة.

المواد والطرق: شملت الدراسة 12 عينة محفوظة وذات ظروف تثبيت وإدماج غير معروفة لأورام عضلية ملساء رحمية مستأصلة من 12 مريضة بالاضافة لخمسة أورام طازجة تم الحصول عليها من رحم مستأصل وتثبيتها في 6% من الفورمالين لمدة 22 ساعة، ثم دمجها بالبارافين يدويًا. كان حجم المقاطع النسيجية وكميتها وسماكتها مماثلاً بين العينات الطازجة. تم استخلاص الحمض النووي الجينومي والحكم على النتائج من خلال تركيز ونوعية الحمض النووي المعزول ونجاح تضخيم exon2-MED12 بالتفاعل السلسلي للبوليمراز. تم الحصول على مقاطع إضافية لونت بالهيماتوكسيلين والإيوزين لفحص الأنسجة تحت المجهر.

النتائج: لم ينجح تضخيم exon2-MED12 بالتفاعل السلسلي للبوليمراز واستخلاص الحمض النووي من الأنسجة المحفوظة المثبتة بالفورمالين والمدمجة بالبارافين، بينما كان التضخيم من حمض نووي مستخلص من العينات الطازجة وبتركيز منخفض يصل إلى 7.7 نانوغرام/ميكرولتر (أو أكبر) ناجحًا. لم يرتبط حجم المقطع وكميته وسماكته بوزن النسيج أو تركيز الحمض النووي، لذا قمنا بالتحقق من كثافة الخلايا في المقطع كسبب معقول للاختلافات الملحوظة. تباينت كثافة الخلايا بالفعل في العينات وارتبطت بشكل أفضل مع تركيز الحمض النووي.

الاستنتاجات: أدى تثبيت الأنسجة الأمثل (المدة والتركيز) إلى تضخيم exon2-MED12 ناجح. يشكل كل ورم من الأورام العضلية الملساء الرحمية عينة فريدة من نوعها ويجب أخذ هيستولوجية الأنسجة في الاعتبار من أجل استخلاص حمض نووي وتفاعل سلسلي للبوليمراز مثمرين. يمكن أن تكون العينات الإستثنائية التي تحتوي على أنسجة نادرة وحمض نووي قليل التركيز قابلة للتضخيم بالتفاعل السلسلي للبوليمراز والاختبارات الجينية التي تليه. توصي الدراسة بتوثيق شروط التثبيت والإدماج للأنسجة المثبتة بالفورمالين والمدمجة بالبارافين بحيث يمكن إتخاذ قرارات مستنيرة فيما يتعلق باستخدامها لاستخلاص الحمض النووي والاختبارات اللاحقة.

الكلمات المفتاحية: نسيج مثبت بالفورمالين ومدمج بالبارافين؛ استخلاص الحمض النووي؛ التفاعل السلسلي للبوليمراز. جين MED12؛ ورم عضلي أملس رحمي.