إنتاج وكشف الأنكسين 5 البشري المؤشب باستخدام أضداده النوعية المتعددة النسيلة المنتجة في الأرنب

الملخص

الأنكسين 5، بروتين يبلغ وزنه الجزيئي 35 كيلو دالتون، يرتبط بشوارد الكالسيوم ويمتاز بألفته العالية للفوسفاتيديل سيرين أحد الشحوم الفوسفورية المكونة للغشاء الخلوي. بالإضافة لكونه واسماً مهماً لعملية الموت الخلوي المبرمج، تبين أن بروتين الأنكسين 5 ذو صلة بالعديد من التغيرات الخلوية والفيزيولوجية ويتواجد في أمصال العديد من المرضى. تعد الأضداد أداة مهمة في أبحاث التقانة الحيوية والتطبيقات الطبية العلاجية والتشخيصية. تستهدف الأضداد متعددة النسيلة عدة محددات مستضدية (Epitops) من المستضد (Antigen). في هذا العمل، تم تحضير بروتين الأنكسين 5 المؤشب وذلك بالتعبير عنه في الإشريكية القولونية (E.coli)، وتنقيته من سيتوبلازما هذه البكتريا باستعمال طريقة كروماتوغرافيا الألفة السائلة المعدنية. تم تمنيع الأرنب بالأنكسين 5 النقي المحضر في مُسَاعِد فروند وذلك بهدف الحصول على أضداده النوعية المتعددة النسيلة. تم تقييم الاستجابة المناعية للأرنب الممنَع ومعايرة الغلوبولينات المناعية من الصفG . نُقيت الأضداد من مصل الأرنب باستخدام عمود البروتين A. أظهرت النتائج قدرة هذه الأضداد النوعية المتعددة النسيلة المحضرة في الأرنب على الكشف عن الأنكسين 5 في اختباري المقايسة المناعية الأنزيمية والتبصيم المناعي. كما تمكنت هذه الأضداد من التقاط الأنكسين 5 ومن ثمَّ يمكن توظيفها كبديل عن الضدّ التجاري في تحديد تركيز الأنكسين 5 في العينة المدروسة ومن الممكن وسم هذه الأضداد في المستقبل بغية تحديد موقع الأنكسين 5 في النسيج الحي.