أمثلة اختبار لتحديد متيلة جين TWIST2 بالاعتماد على تقانة MethylScreen

الملخص

يعرف TWIST2 بأنه عامل انتساخ منظم للحوادث الضرورية للتكون الجنيني وتطور الأورام وتشكل النقائل. حددت الدراسات أن متيلة DNA إحدى التغيرات فوق الوراثية المسؤولة عن تنظيم تعبير الجين TWIST2. ويعد تحليل متيلة الحمض النووي بالطرق التقليدية إجراءً مستهلكاً للوقت والجهد.

قمنا في هذه الدراسة بتصميم اختبار وبادئات لدراسة متيلة 14 موقعاً من مواقع CpG في الجين TWIST2 وذلك بالاعتماد على تقانة MethylScreen. تمت أمثلة شروط تفاعل الكشف واختبار صلاحية هذا الاختبار في الخطوط الخلوية SK-OV-3 وA2780 المشتقة من سرطان المبيض. كما تمت دراسة تغيرات التعبير الجيني في الخطين الخلوين المدروسين بواسطة qPCR

أشارت نتائجنا إلى أن البادئات المصممة تعطي ناتج تضخيم وحيد وبطول 151bp، وأن درجة حرارة التصاق البادئات المثلى هي 60 °C. كما استطاعت البادئات تضخيم 50ng من DNA بشكل مبكر في تفاعل qPCR. بينت النتائج أيضاً أن الجين TWIST2 غير ممتيلة في خلايا SK-OV-3، بينما ازدادت نسبة متيلة المنطقة المدروسة في الخلايا A2780 فكانت 3.7% ممتيلة بشكل مفرط و88.5% متوسطة المتيلة و7.8% غير ممتيلة. وارتبطت المتيلة في خلايا A2780 بانخفاض التعبير الجيني بمقدار 0.05 ضعف بالمقارنة مع خلايا SK-OV-3.

نستنتج أن الاختبار المصمم لكشف متيلة TWIST2 قابل للاستخدام في تحديد متيلة الجين الهدف، ويتم الكشف فيه بمدة زمنية قصيرة نسبياً وبمراحل عمل قليلة وبتكلفة أقل بالمقارنة مع الطرق التقليدية.