إنتاج سلالة محلية من طفيليات الليشمانيا المدارية Leishmania tropica محورة جينياً ومعبرة عن بروتين GFP
الكلمات المفتاحية:
الليشمانيا المدارية، التحوير، جين مُخبِرة، GFP، بلاسميدات LEXSYالملخص
تُستخدم الطفيليات المحورة المُعبرة عن البروتين المتفلور الأخضر Green fluorescent protein اختصاراً GFP بشكل واسع كأداة لدراسة الآليات الإمراضية في نماذج حيوانية متعددة، وقد تم الاعتماد عليها حديثاً في تقييم فعّالية المواد الدوائية. هدفت هذه الدراسة إلى الحصول على سلالة محلية من طفيليات الليشمانيا المدارية المحورة جينياً والقادرة على التعبير بشكل دائم عن بروتين GFP. لتحقيق ذلك تم تحضير البنية البلاسميدية pLEXSY-GFP-sat2.1 بكمية كافية ومن ثّم تجهيزها بالشكل الخطي، بعدها حُوّرت طفيليات عزلة محلية من الليشمانيا المدارية L. tropica بهذه البنية وذلك بوساطة التثقيب الكهربائي Electroporation. تعمل هذه البنية على إدخال الجين المُرمِّز للـGFP ضمن المواقع العديدة لجينات 18s-rRNA في جينوم الليشمانيا. تكتسب الطفيليات المحورة صفة المقاومة للصاد الحيوي Nourseothricin، ويمكن الاعتماد على هذه الصفة في انتقاءها، كما تبدأ بالتعبير عن بروتينGFP والذي يمكن كشفه باستعمال مجهر الفلورة. أظهرت النتائج نجاح عملية التحوير والحصول للمرة الأولى في سورية على سلالة محلية محورة من الليشمانيا المدارية L. tropicaGFP تُعبر بشكل دائم عن
بروتينGFP سيتوبلاسمي التوضع والتي يمكن استعمالها فيما بعد في تطبيقات بحثية مختلفة.
التنزيلات
